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全自动样品快速匀浆机提取土壤微生物基因组DNA實驗案例

文章出處:admin作者:上海淨信 人氣:发表时间:2019-05-21 11:56

(還可以提取如沈積物,排泄物,廢水,雪水等樣品的DNA)土壤微生物基因組DNA抽提試劑盒/提取試劑盒

(利用矽吸附DNA原理)

一,說明

本試劑盒可以在30分鍾內快速有效的直接從土壤分離微生物基因組DNA。用上海淨信科技(全自動樣品快速勻漿機)FSTPRP儀器(將樣品與緩沖液加入帶有特殊小珠的樣品管/離心管)在40秒內可以裂解土壤中的植物、動物組織、細菌、藻類、真菌孢子、酵母、線蟲。經過本試劑盒的分離純化,所得的DNA可以用于PCR、限制性酶切、電泳和其他使用。

濃縮SEWS-M使用前加入25ML無水乙醇,並在瓶子上做好標記,蓋好瓶蓋

WASH D使用前加入56ML无水乙醇,并在瓶子上做好标记,盖好瓶盖

用1ML  ddH20(灭菌)完全溶解RNA酶,将RNA酶放入水中煮,水沸后再煮沸20分种,并掉炎,缓慢冷至室温后,将RNA酶取出,全部加入 sodium phosphate buffer中,充分混匀后,将sodium phosphate buffer buffer 放入4度保存。

試劑盒組成

全自动样品快速匀浆机提取土壤微生物基因组DNA實驗案例

二,步驟

加入500MG 土壤样品到一个样品管中,管中应管有0.05-0.1ml  空间。

(注意一,爲使樣品盡可能遙多均勻,一個樣品一般取四個管,兩管並一管,得到兩管的DNA,注意二,在試驗中,可用普通離心管+氧化锆珠(0.8g),注意三,應將放在-20度的樣品上一天取出化凍)

加入0.1956ml  sodium phosphate buffer 到样品中

加入0.0244ml MT buffer 到样品中

用上海净信科技(全自动样品快速研磨机机)仪器以速度14单位频振60S 反复三次(确保完全可以粉碎)

13000rmp  离心5-10min ,沉淀碎片    (注意一,加一步去除腐酸的步骤:取上清到10研磨单位离心管,加入。。。颠倒混匀,2MIN   12005MIN看不清)

将上清(约0.12ml)转移到一个干净的2研磨单位离心管中,加入0.05ml  PPS到管中,用手颠倒混匀10次。

13000RPM 离心5MIN 以沉淀蛋白质,转移上清到一个干净的2研磨单位离心管中(约0.14ml)

加入1ML Binding solution b(5倍体积)到2研磨单位离心管中,用手颠倒混匀2MIN (提前水加热,促进DNA与硅胶给合)

将结全柱放入2ML收集管中,净混合液加入结合柱中,室温放置2 min.(分三次加,每次加0.12-0.14ml两管并一管)

13000RPM離心1MIN,倒掉收集管中的廢液,將結合柱重新放入2研磨單位離心管中。

加入0.1ml SEWS-M(Spin-buffer)到结合柱中,13000RPM离心1MIN,倒掉收集管中的废液。

注去注腐殖酸
 

在1.5研磨單位離心管中制備腐殖酸洗滌溶液:

Sodium phosphate buffer  978UL

MT  buffer            0.0244ml

Pps:                  250ul

混勻,13000RPM離心1分種轉移上清液于一個幹淨的2研磨單位離心管中。

加入等体积的5M Guanidine Thiocyanate sojution 混匀。

加入0.1ml 腐殖酸洗涤液到步聚11中的结合术中,13000RPM离心1分种,倒掉收集管中废液。

重複上述步驟三次

接步驟十二

加入0.13mlwashD  于结合柱中,13000RPM离心1MIN,倒掉收集管中的废液。

將結合柱裝入離心管中,130000RMP離心2MIN

将结合柱装入1.5研磨单位离心管中。室温放置五分种,以便乙醇挥发干净,在膜中央小心加入,0.015ml DES  。不要戳破膜,室温放置2MIN。(37度  30MIN)

13000RPM离心1MIN 离心管中即为分离的DNA,贮存于-20度或进入下一步室实验。(应将2管DNA混于一管,混匀,再分成两管,这样即能得到4管一管的目的。目的是尽量消除样品内部差异)

本實驗不用去除腐殖酸這一步,但有文獻指出,在-20度時,腐殖酸仍會降解DNA,

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